金线莲的离体快繁技术

金线莲别名花叶开唇兰，为兰科开唇兰属多年生草本植物，是一种珍稀中草药。有关部门测定发现，金线莲中氨基酸组成成分含量、抗衰老活性微量元素的含量均高于国产和野生西洋参，在中药界有药王之称。全草味甘，性凉，有清热润肺、消肿解毒的功效。用于治疗肺热咳嗽、肺结核、风湿性关节痛、胃炎、膀胱炎、肾炎、吐血、毒蛇咬伤；还可降低胆固醇，防止血压升高等。

由于人们长期大量采挖和野生动物包括昆虫的咬食，加之近年来的山地开发、生态资源的破坏，野生金线莲数量大为减少，致使药源紧缺，国内外市场供不应求。

金线莲的种子发育不全，在自然条件下发芽率很低，传统的分根扦插繁殖时间长、繁殖系数低，无法大量种植生产。而利用植物组织培养繁殖可大大提高繁殖速度，并有效地保护野生资源，解决中药材来源匮乏的问题，满足人们用药的需要。

在培养基中添加马铃薯提取液来取代水解乳蛋白或其它有机复合物，既降低了成本，又取得了较好的培养效果。

一、离体快繁技术

1、外植体的准备

为了获得较多的接种材料和降低污染率，可将植株剪成带2～3节的插条扦插于细河沙与珍珠岩的混合基质中，浇透水，搭一塑料小拱棚，在棚上盖上双层遮阳网，使温度保持在20～25℃，湿度在80%左右，25天生根发芽。当芽长到1cm左右时剪下，作为接种材料。采芽前15天左右不要浇水。也可以直接从产地取嫩枝作为外植体。

2、培养条件及马铃薯提取液的制作方法

以N6培养基为基本培养基。根状茎诱导培养基：N6＋6～BA0.5mg/L＋NNA0.1mg/L＋10%马铃薯提取液＋0.08%活性炭；增殖培养基：N6＋6～BA0.1mg/L＋NNA0.2mg/L＋10%马铃薯提取液＋0.08%活性炭。上述培养基均加0.7%琼脂和3%白糖，pH5.5～6.0。培养温度20～25℃，每天光照12小时，光照度2000～2500Lx。

马铃薯提取液的制作方法：将未发芽的马铃薯去皮，按需制培养基量计算并称量，用清水洗净，切成厚2～3mm、长和宽分别为3～4cm的薄片，放入比需制培养基量少一些的清水中，大火煮开后15～20分钟，用单层纱布过滤，其过滤液即为马铃薯提取液。

二。生长与分化

1、无菌材料的获得

将金线莲嫩枝上的叶片去掉，留1～2mm长的叶柄以保护腋芽；把嫩枝剪成单节茎段，然后将茎段和芽用洗衣粉液摇洗，再用清水洗净，放自采水下冲洗 30分钟以上。在无菌条件下用75%乙醇浸泡30秒，转到0.1%HgCl2液中灭菌5～6分钟，再用无菌水摇洗3～4次，接种到根状茎诱导培养基上，每瓶接1个茎段或1个芽。

2、根状茎的诱导及芽的生长

接种在根状茎诱导培养基上的茎段从第3周开始长出嫩绿色尖尾状的腋芽；1个月时腋芽长成根状茎；75～90天后，根状茎长2～5cm，有节3～4个，根状茎的下部叶呈鳞片状，上部的1～2片叶为真叶。以芽为夕随体的，接入10天时生根，芽开始生长；1个月时芽长成高2cm左右的小苗，叶色为它本有的紫黑色；75～90天时小苗高7～8cm，有3～4个节，2～3条根。此时可转接并进入增殖培养阶段。

3、根状茎及小苗的增殖

将在根状茎诱导培养基上培养了75～90天的根状茎及小苗，剪成段（1节1段），转接在增殖培养基上，1瓶接5～6个节段或芽。接入7天后，根状茎开始生长，并逐渐长成成束的根状茎；75～90天后，每束有根状茎3～7条，每条根状茎上有3～4个节，下部节上的叶为鳞片状，上部的为真叶。直立茎段、芽及根状茎上剪下的顶芽，在增殖培养基上培养7天，开始生根长芽，并逐渐长成直立的小苗；75～90天后，小苗又长成高7～8cm、有3～4个节、2～3条根的完整植株。每75～90天为1个继代增殖周期，每个继代增殖周期的繁殖系数是：芽的繁殖系数为3～4，茎段的为9～28。

4、瓶苗的移栽

当苗高6～7cm、有2～3条根、根长1～3cm时可炼苗移栽。移栽前，将瓶苗移出培养室，放在实验室中炼苗7～10天，然后打开封口膜，小心取出苗，洗掉根部的培养基，栽入细河沙与珍珠岩的混合基质中（细河沙∶珍珠岩=3∶1），并给它们搭一塑料小拱棚，在棚上盖上双层遮阳网，使温度保持在20～25℃、湿度80%左右。栽后25天生根成活，成活率80%以上。

5、移栽苗的管理

金线莲喜温暖、湿润、半阴的环境，通气良好、偏酸的土壤。所以，除冬季外，其他季节均要盖上遮阳网。气候干燥时要常向叶面喷水，每3～5天浇透水1次，使土壤保持湿润。如果用自来水浇灌金线莲，最好先将自来水存放2～3天后再浇。在生长季节，用0.3%尿素加0.2%磷酸二氢钾和0.2%硫酸亚铁灌根，每半个月浇灌1次，连续4～5次。冬季不施肥，少浇水，并保持棚温在10℃以上。